CanAg NSE - ELISA

Le Test CanAg NSE EIA est en phase solide. Cet immuno-test, non-compétitif, est basé sur deux anticorps monoclonaux (de la souris) dirigés contre deux déterminants antigéniques séparés de la molécule NSE. Les anticorps monoclonaux (Mab) utilisés, relèvent de la sous-unité  de l’enzyme et de ce fait détecte à la fois les formes  et .

Les Calibreurs et les échantillons de patients sont incubés ensemble, avec Anti-NSE Mab E21 biotinylé et la peroxydase du raIFO/rt (HRP) étiquetée Anti-NSE Mab E17, dans des barrettes microtitre enduites à la Streptavidine.

Après lavage, le réactif tampon substrat/chromogène (peroxyde d’hydrogène et 3, 3’, 5, 5’ tétra-méthyl-benzidine) est ajouté dans chaque puits et la réaction enzymatique peut commencer.

Pendant la réaction enzymatique, une couleur bleue se développe si l’antigène est présent. L’intensité du développement de la couleur est proportionnelle à la quantité de NSE présent dans les échantillons. L’intensité de la couleur est déterminée par un Spectrophotomètre pour plaque microtitre à 620 nm (ou optionnellement à 405 nm) après addition de la Solution d'Arrêt.

Les courbes de calibrage sont construites pour chaque test en mettant sous forme graphique les valeurs d’absorbance contre la concentration de chaque Calibreur. Les concentrations de NSE des échantillons de patients sont alors lues à partir de la courbe de calibrage.